Největší reakce však vyvolala část programu, kde vystoupili drag queens – muži, kteří se chovají a oblečením i líčením stylizují do ženské role, často za účelem zábavy nebo satiry.Kontroverze vyvrcholila živým ztvárněním známé malby Poslední večeře od Leonarda da Vinciho, kde vystoupil hlavní protagonista namalovaný namodro. Tento výstup vyvolal ostrou kritiku zejména od křesťanského publika. Bývalá americká plavkyně Riley Gainesová, známá svým bojem proti účasti transgender sportovců v ženských soutěžích, na sociálních sítích psala: „Muži v parukách v popředí olympijských her. Ať už mi nikdo neříká, že tato skupina je utlačována nebo marginalizována.“ Kritiku přidal i majitel sociální sítě Elon Musk: „Bylo to extrémně neuctivé vůči křesťanům.“Konzervativní francouzská europoslankyně Marion Maréchaová se ohradila: „Všichni křesťané světa, kteří sledujete ceremoniál a cítíte se uraženi touto parodií na Poslední večeři, vězte, že to není Francie, kdo k vám mluví, ale levicová menšina připravená na jakoukoli provokaci.“ Španělský prezident fotbalové La Ligy Javier Tebas také vyjádřil své rozhořčení: „Neakceptovatelné, neuctivé a hanebné. Využití motivu Poslední večeře na pařížské olympiádě je urážkou pro nás křesťany. Kde je respekt k náboženství?“Deník Marca ve své reportáži napsal, že ceremoniál zahrnoval odkazy na LGBTQ+ komunitu, což rozčílilo část francouzské krajní pravice a vyvolalo mnoho kontroverzí. Záměrem organizátorů bylo ukázat rozmanitost a inkluzi na nejvýznamnější sportovní události světa.
